膠體金的制備

　　1、膠體金的制備方法
　　制備膠體金溶液   常用的方法是化學(xué)還原法，基本原理是向濃度的金溶液內(nèi)加入量的還原劑使金離子變成金原子。使用不同種類、不同劑量的還原劑，可制備出不同大小的膠體金顆粒。常用的制備方法有自磷還原法、抗壞血酸還原法、檸檬酸三鈉還原法、靴酸~檸檬酸三鈉還原法、乙醇超聲波還原法和硼氫化鈉還原法等。其中   常用的制備方法為檸檬酸三鈉還原法：將0.01的氯金酸溶液加熱至沸騰廠，攪拌的同時加入1%的檸檬酸三鈉水溶液，繼續(xù)加熱，直到溶液顏色逐漸由淺黃色變?yōu)槌吻逋该鞯募t色。此法制備程序簡單，膠體金的顆粒形狀、大小較均一。
　　2、膠體金標記
　　膠體金-蛋白復(fù)合物又稱膠體金探針，用于免疫測定時多簡稱為免疫膠體金(immunogold)。膠體金標記蛋白的制備，實質(zhì)上是蛋白質(zhì)等生物大分子物質(zhì)被吸附到膠體金顆粒表面的包被過程。標記前需將蛋白質(zhì)用雙蒸水透析以除去影響標記的電解質(zhì)，然后通過系列稀釋法找出能使膠體金穩(wěn)定的蛋白質(zhì)溶液的   低濃度，在此基礎(chǔ)上再加1%~20%，即為   佳標記量。將待標記蛋白以   佳標記量適當稀釋后，緩慢滴加到膠體金中，繼續(xù)攪拌20min，然后緩慢滴加10%的BSA至終濃度為0.5%或1%(或加入10%PEG20000至終濃度為1%)，繼續(xù)攪拌1h。4℃靜置2~3h或(過夜)，終止反應(yīng)。反應(yīng)結(jié)束后，4℃10000r/min離心1h，棄上清液。將沉淀懸浮于1/10原體積的1%BSA中，離心洗滌，加入等體積的1%BSA溶液，   后加入含0.02%疊氮鈉劑的下BS緩沖液懸浮，即可獲得膠體金探針，也可加甘油混勻，4℃保存?zhèn)溆?。標記好的免疫膠體金溶液可4℃保存數(shù)月。